第四届“月旭科技杯”色谱技术交流赛实操赛于2026年8月19日圆满结束。历经两轮笔试筛选，来自企业检测机构和各大高校的参赛选手齐聚赛场，将色谱理论落地到实际操作，比拼样品前处理、色谱条件筛选及方法开发全流程综合能力。

大赛的初衷旨在搭建行业技术交流平台，打通理论与实操壁垒，拉近我们月旭与分析从业者的距离，以赛促学，实现技术双向交流与共同进步。

这次实操题到底考了什么？难点在哪里？选手们又容易在哪些环节失分？这篇复盘，一次说清。

一、实操赛制概况：双组别独立竞技

本次竞赛分为职业组、高校组两大组别，两组独立命题、独立评分评奖，保障赛事公平性。

职业组

分为两组，在两套难度对等、考察方向不同的实操题目中抽签

考题一：多种芳香族同分异构体的分离

考题二：多种核酸碱基极性物质的分离

高校组

考题：多羟基苯环骨架天然产物的分离

统一考核指标

峰与峰之间分离度Rs≥1.5

理论塔板数≥3000

输出完整方法开发报告

二、典型考题详细解析

化合物结构解析：

5种化合物均为含氮杂环芳香类极性小分子，是构成核酸DNA/RNA的基础单元。

1、pH是关键变量

分子内均含有多个氨基、亚氨基、羰基官能团，存在多个可解离位点，具备不同pKa数值。

pH变化会改变分子解离状态，进而直接影响：分子极性、反相色谱保留行为以及峰形，是方法开发首要考量因素。

2、极性过强，保留不足

整体极性极强，水溶性相对较好；普通C18固定相疏水作用弱，组分保留时间很短，极易出现共流出。

3、鸟嘌呤是“特殊难点”

个体理化性质差异显著：鸟嘌呤分子共轭平面大，但溶解度极差，水、常规有机相均难溶解，需要碱性介质助溶；其余4种碱基水溶性优于鸟嘌呤。

4、均适合紫外检测

全部组分具备紫外共轭结构，拥有紫外特征吸收，适合紫外检测器检测。

核心难点：

化合物极性强，普通C18保留弱；鸟嘌呤溶解度很差，纯水、常规有机溶剂溶解困难，需要碱性助溶；不同碱基pKa差异大，pH直接改变离子化状态，显著影响保留、峰形与选择性。

样品配制（选手极易失分）

1、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶可直接用水溶解。

2、鸟嘌呤溶解性差，需要0.25 M NaOH搭配缓冲盐助溶。

3、腺嘌呤可使用15%甲醇-水溶解。

4、混标配制时，不同溶剂单标相互混合，注意盐、碱析出风险。

核心考点：

1、结构解析：识别碱基极性、解离特性及溶解度难点。

2、色谱柱选型：理解普通C18的局限性，合理选择耐100%水相色谱柱 AQ-C18 / Polar-RP。

3、流动相pH、缓冲盐筛选，避开TFA等错误条件。

4、样品前处理：解决难溶物质配制难题。

5、单标逐个进样定性，完成系统适用性验证。

三、大赛评分体系：

操作细节+方法开发双重考核

裁判一对一全程跟踪记录，评分分为两大模块，实操细节决定得分上限。

模块一：操作规范性

涵盖：

● 实验基础习惯

● 天平称量

● 流动相配制（抽滤、超声脱气、标签）

● 样品配制（溶解、定容混匀、进样小瓶润洗）

● 色谱柱安装与过渡

● 色谱柱冲洗与保存

● 仪器上机操作

● 原始记录与报告书写

这些看似细小的操作，都会直接影响最终得分。

模块二：方法开发合理性

1、方法开发思路

● 化合物结构解析

● 色谱柱选择思路

● 流动相选择逻辑

● 检测波长合理性

● 单标定性定位

2、系统适用性（权重最高）

● 分离度Rs≥1.5满分

● 理论塔板数≥3000

● 相同考题选手横向对比峰形

● 柱效

3、分析效率

● 单针运行时间

● 整套实验总耗时

不只是达到分离即可，分离效果、峰形、分析效率、报告逻辑，全部纳入综合评价。

四、赛前技术交流干货

大赛配套技术分享，梳理完整HPLC方法开发逻辑：

第一步：先解析待测物

结构→pKa→极性→溶解度，锁定保留模式。

第二步：选择色谱柱固定相

● 通用分离：XB-C18

● 高水相条件：AQ-C18、Polar-RP

● 异构体分离：XS-C18、PFP

● 宽pH场景：Xtimate系列

第三步：开发流动相

● 有机相甲醇/乙腈选择性差异巨大

● pH避开pKa±1.5波动区间，保证保留稳定

● 缓冲盐体系的选择

● TFA合理取舍

第四步：别忽视样品前处理

重视样品溶剂效应、溶解度问题，很多实验失败根源不在色谱条件，而在前处理。

五、写在最后

色谱方法开发，没有万能条件，只有基于化合物性质的理性选择。 

从极性核酸碱基、难分同分异构体，到多酚天然产物，三套考题分别考验了：

极性物质保留

异构体分离选择性

天然产物梯度方法开发

覆盖了日常检测中的多个高频场景。

而真正的方法开发能力，从来不只是“找到一个能出峰的条件”，更是从结构分析、样品前处理、色谱柱筛选到流动相优化的系统性思考。